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高效液相色譜法測定甘草酸二銨注射液中有關(guān)物質(zhì)
【論文關(guān)鍵詞】 甘草酸二銨；注射液；有關(guān)物質(zhì)；高效液相色譜法
【論文摘要】 目的 建立高效液相色譜檢測甘草酸二銨注射液中有關(guān)物質(zhì)。 方法 選用C18柱，0.01mol/L磷酸溶液[或磷酸鹽緩沖溶液]—乙腈（62：38）；對(duì)其配比可用梯度法改變配比，使其理論塔板數(shù)不低于3000。流速1.0ml/min，進(jìn)樣量10ul。 結(jié)果 在該色譜條件下，甘草酸二銨注射液分離良好。結(jié)論 本法靈敏、準(zhǔn)確、簡便，可作為甘草酸二銨注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。
甘草酸二銨 是甘草有效成分的第三代提取物，具有較強(qiáng)的與皮質(zhì)醇類似餓非特異性的抗炎、保護(hù)肝細(xì)胞膜及改善肝功能的作用，可減少肝細(xì)胞的水腫、壞死。本研究采用HPLC法1］［一，二］，建立了甘草酸二銨注射液中有關(guān)物質(zhì)的測定方法。
1 實(shí)驗(yàn)
1.1 藥品和試劑
儀器:SP8800型高效液相色譜儀（美國Spectra-physics公司）
色譜柱：Kromasil C18(250×4.6mm,5µm)
試劑:磷酸（分析純）新鄉(xiāng)市化學(xué)試劑廠; 乙腈(色譜純)TEDIA company.INC USA； 鹽酸（藥用級(jí)）湖南爾康制藥有限公司； 氫氧化鈉（藥用級(jí)） 湖南爾康制藥有限公司；甘草酸二銨對(duì)照品 中國藥品生物制品所； 供試品（自制，批號(hào)：080714），純化水 自制。
2方法與結(jié)果：
2.1檢測波長的選擇：因紫外最大吸收波長為252nm，并根據(jù)其含量測定時(shí)選用的波長252nm，仍選此波長作為液相的檢測波長。
2.2色譜條件：選用C18柱，0.01mol/L磷酸溶液[或磷酸鹽緩沖溶液]—乙腈（62：38）；對(duì)其配比可用梯度法改變配比，使其塔板數(shù)不低于3000。流速1.0ml/min，進(jìn)樣量10ul。
3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取本品5ml于25ml容量瓶中，加水至刻度，制成1mg/ml(或0.5mg/ml，以出峰情況定)的溶液，進(jìn)樣10ul，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍，實(shí)現(xiàn)主峰與雜質(zhì)峰完全分離或達(dá)到基線分離，并且理論塔板數(shù)不低于3000。
結(jié)果：樣品(批號(hào)：080714)的主峰與雜質(zhì)能夠完全分離，理論塔板數(shù)為9802；有關(guān)物質(zhì)為4.8%。
4專屬性試驗(yàn)：
4.1 酸破壞試驗(yàn)：取本品5ml于25ml容量瓶中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，放置2小時(shí)后，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml中和，再加水至刻度，作為酸破壞溶液。
4.2 堿破壞試驗(yàn)：取本品5ml于25ml容量瓶中，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，放置2小時(shí)后，加鹽酸溶液1mol/L 5ml中和，再加水至刻度，作為堿破壞溶液。
4.3 氧化破壞試驗(yàn)：取本品5ml于25ml容量瓶中，加30%雙氧水溶液1ml，放置2小時(shí)后，置水浴80℃加熱1小時(shí)除去剩余的雙氧水，再加水至刻度，作為氧化破壞溶液。
4.4 高溫破壞試驗(yàn)：取樣品于110℃加熱2小時(shí)后，精密量取5ml于25ml容量瓶中，再加水至刻度，作為高溫破壞溶液。
4.5 光照破壞試驗(yàn)：取樣品于紫外燈下365nm波長光照4小時(shí)后，精密量取5ml于25ml容量瓶中，再加水至刻度，作為光照破壞溶液。
取以上5種溶液，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。分析結(jié)果。要求：各雜質(zhì)峰與主成份峰分離效果良好。
結(jié)果：各雜質(zhì)峰與主成份峰分離效果良好；其中各項(xiàng)試驗(yàn)的有關(guān)物質(zhì)為：
6最小檢測限：取本品，按濃度稀釋法進(jìn)樣分析（分別按10、100、1000、10000、100000倍稀釋），測定色譜系統(tǒng)基線。以信噪比為3：1時(shí)的進(jìn)樣量為檢測限。計(jì)算得本條件下的甘草酸二銨的檢測限。
結(jié)果：測得最小檢測限為：1.5ng/ml。
7精密度試驗(yàn)：取甘草酸二銨對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋至約0.1mg/ml的溶液，進(jìn)樣10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，結(jié)果峰面積的RSD為0.46%，表明該溶液進(jìn)樣精密度良好。
8穩(wěn)定性試驗(yàn)：取本品，制成1mg/ml的溶液，每隔2小時(shí)測定1次，考察甘草酸二銨注射液12小時(shí)的穩(wěn)定性，要求：RSD〈2%。
結(jié)果：其總有關(guān)物質(zhì)RSD為1.2%，最大雜質(zhì)RSD為0.83%，次大雜質(zhì)為1.6%，其表明穩(wěn)定性良好。
9有關(guān)物質(zhì)的測定：
精密稱取本品適量，用水稀釋制成每1ml中約含1mg溶液，作為供試品溶液。精密稱取供試品溶液適量，用水稀釋成每1ml中含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液10ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%-25%，再精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液色譜圖中各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照品溶液主峰面積（10%）；其中供試品溶液色譜圖中最大雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照品溶液主峰面積的2/5（4%，次大雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照品溶液主峰面積的1/4(2.5%).
10討論
（1）本試驗(yàn)采用HPLC法測定甘草酸二銨注射液中的有關(guān)物質(zhì)，操作簡便、快速，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而能有效地控制該的質(zhì)量。（2）在流動(dòng)相的選擇比較了乙腈-水系統(tǒng)、乙腈-磷酸溶液系統(tǒng)等，發(fā)現(xiàn)甘草酸二銨與有關(guān)物質(zhì)不能很好地分離，且色譜圖中主成分峰有明顯的脫尾現(xiàn)象，方法不合理。后來試加入磷酸鹽緩沖液，結(jié)果能使甘草酸二銨與有關(guān)物質(zhì)達(dá)到良好的分離，并消除了主峰脫尾現(xiàn)象。（3）在主藥的稀釋溶劑選擇上，考慮到甘草酸二銨易溶于水，比較了用流動(dòng)相和水作為溶劑進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)兩種供試樣品的色譜圖中，主峰與有關(guān)物質(zhì)都能達(dá)到很好的分離，且檢測結(jié)果無明顯差異。為方便操作和節(jié)約，選用純化水作為稀釋溶劑。
【參考文獻(xiàn)】
1 國家藥典委員會(huì).中國藥典二部,2005年版.北京：化學(xué)出版社
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