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HPLC法測定雙黃連顆粒中連翹苷的含量
雙黃連顆粒是由金銀花、黃芩、連翹制成的純中藥制劑，具有疏風(fēng)解表、清熱解毒的功效。其質(zhì)量標準收載于《中國藥典》2005年版一部，但標準中沒有連翹的含量測定方法，不能有效的控制藥品質(zhì)量。方中連翹含量最大，具有清熱解毒、消腫散結(jié)的作用，其有效成分為連翹苷。為有效控制藥品質(zhì)量，我們試用HPLC法測定雙黃連顆粒中連翹苷的含量，取得良好效果。
1 儀器與試藥
Agilent Technologies 1200 Series 高效液相色譜儀，Agilent Technologies G1314B VWD 檢測器,色譜工作站：LabAlliance PC 2000分析之星，連翹苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號0821 200104);雙黃連顆粒(批號20060612、20060816、20060824，哈藥集團制藥六廠);甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱KromasilC18(4.6×200 mm，5 μm)，流動相乙腈 水(25∶75)，流速1 0 ml/min,檢測波長277 nm，柱溫30℃，進樣量20 μl。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取80℃干燥至恒重的連翹苷對照品5.65 mg，置于100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。
2.2.2 樣品溶液的制備：精密稱取本品粉末3 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，稱定質(zhì)量，浸漬過夜，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足減少的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5 g，拌勻，加置中性氧化鋁柱(100～120目，2 g，內(nèi)徑1 cm)上，用70%乙醇50 ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用50%甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
2.2.3 陰性對照液：取缺連翹的處方藥，按樣品溶液制備方法制備陰性對照液。
2.3 線性關(guān)系考察 精密量取對照品儲備溶液，1，2，4，6，8，10 ml分別置50 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述方法進樣20 μl，依法測定，外表法計算，以峰面積Y對濃度X(μg/ml)得線性回歸方程：Y=6.145×104X-2.736×102,r=0.9999。結(jié)果表明，連翹苷在0.18～1.25 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.4 精密度考察 取同一對照品溶液連續(xù)進樣5次，每次20 μl，連翹苷峰面積均值為461740，其RSD=1.12%。
2.5 重復(fù)性試驗 取同批號樣品5份，按供試品制備方法制備，依法測定，結(jié)果連翹苷平均含量是0 84 mg/g，其RSD=1 35%。
2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一樣品溶液在0、2、4、6、8、10、12 h分別進樣20 μl，依法測定，結(jié)果7次測定連翹苷峰面積均值為621758，RSD=0.81%。
2.7 加樣回收試驗 取已知含量的樣品適量，精密稱定，精密加入連翹苷對照品適量，按2.2.2樣品溶液制備方法制備回收試驗液，按2.8樣品測定方法測定含量，結(jié)果見表1。表1 加樣回收率試驗結(jié)果樣品含量
2.8 樣品測定 取對照品溶液和樣品溶液用0 45 μm微孔濾膜濾過，各進樣20 μl，讀取峰面積，按外表法計算含量，結(jié)果見表2。表2 樣品中連翹苷的測定結(jié)果批號
3 討論
用HPLC法測定連翹苷含量，試驗比較了多種比例的流動相，以乙腈 水(25∶75)為優(yōu)，保留時間適中。本試驗采用中性氧化鋁洗脫，可以除去雜質(zhì)，70%乙醇可以完全洗脫連翹苷，并可以制成近無色的供試品溶液，這樣有利于分離和保護色譜柱。該方法簡便可靠，精密度高，分離度好，可用于小兒感冒顆粒等的質(zhì)量控制。
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