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檢驗技師考點：單克隆抗體的制備原理
單克隆抗體(MAb)與抗血清(又稱多克隆抗體，PAb)最主要的區(qū)別是MAb為單一種B細胞克隆所產(chǎn)生的一種均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B細胞克隆的標志，是一種獨特型的抗體，它的特異性是針對一個抗原決定簇的。制備單克隆抗體不能用化學分離的方法從多克隆抗體中去分離純化得到它，而是用分離產(chǎn)生抗體的B細胞克隆的方法得到它。為了使B細胞克隆能在體外人工培養(yǎng)下長期存活并產(chǎn)生完全均一的MAb，G.KÖ;hler合Milstein于1975年創(chuàng)立了雜交瘤方法。所以制備單克隆抗體的技術(shù)又稱雜交瘤技術(shù)(hybredoma technique)。
基本原理
其原理是：B淋巴細胞能夠產(chǎn)生抗體， 但在體外不能進行無限分裂; 而瘤細胞雖然可以在體外進行無限傳代， 但不能產(chǎn)生抗體。將這兩種細胞融合后得到的雜交瘤細胞具有兩種親本細胞的特性。
步驟：
一.提取合成專一性抗體的單個B淋巴細胞，但這種B淋巴細胞不能在體外生長。
二.應(yīng)用細胞雜交技術(shù)使骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合，得到雜交瘤細胞。這種細胞既具有B淋巴細胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性
三.對雜交瘤細胞進行細胞培養(yǎng)，選出所需要的細胞群，體外或體內(nèi)培養(yǎng)，從培養(yǎng)液或動物腹水中提取單克隆抗體
單克隆抗體的提純
一般常用金黃色葡萄球菌蛋白A-瓊脂糖4B親和層析法。
單克隆抗體的保存 由腹水中獲得的抗體,經(jīng)離心去除細胞成分，再經(jīng)冷凍超速離心,取上清液加0.1%NaN3，少量分裝，冷凍于-70℃可保存幾年。 但應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則抗體失活，特別是IgM抗體。提純的單克隆抗體,冷凍干燥保存于2～8℃，取出時溶解后，保存于2～8℃，至少一個月內(nèi)可保持穩(wěn)定。腹水抗體也可冷凍干燥低溫(4℃)保存兩年，融化后放置4℃下保存一個月。短期使用的腹水抗體，4℃3～4 個月仍保持穩(wěn)定, 培養(yǎng)上清加0.1%NaN3，貯于-20℃，兩年不失活性。
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