HPLC法測定復方靈芝顆粒中五味子甲素的含量
【關鍵詞】復方靈芝顆粒
摘要：目的 建立復方靈芝顆粒中五味子甲素含量測定的方法。方法 用高效液相色譜法測定，色譜條件為：C18柱，(5 μm,250×4.6 mm)，流動相為甲醇水(體積比75∶25)，檢測波長為254 nm。結果 五味子甲素在0.1608～6.432 μg范圍內呈現(xiàn)良好的線性關系(R=09996)，平均加樣回收率為99.27%，RSD=1.02%(n=6)。結論 該法操作簡便、準確，重復性好，建立的定量方法可用于復方靈芝顆粒質量的控制。
關鍵詞：HPLC;復方靈芝顆粒;五味子甲素
Abstract: Objiective To establish a method for the content determination of deoxyschizandrin in complex Lingzhi granule. Methods HPLC was performed on an ODS-C18 column (5μm,250 mm×4.6 mm) using methanolwater (75∶25) as the mobile phase under the detection wavelength of 254 nm. Results The linear range of deoxyschizandrin was 0.1608-6.432μg. The mean recovery was 99.27% with RSD 1.02%(n=6).Conclusion This method is simple,reproducible and accurate for the content determination of deoxyschizandrin in complex Lingzhi granule.
Key words:HPLC;complex Lingzhi granule;deoxyschizandrin
復方靈芝顆粒具有保護肝臟降低谷丙轉氨酶和退黃作用，用于急性傳染性黃疸肝炎，遷延性肝炎，慢性肝炎，單項谷丙轉氨酶升高等癥，其現(xiàn)行標準收載于中藥部頒標準2冊，該藥由靈芝、柴胡、五味子和郁金4味藥材組成，五味子為方中主藥之一，為了提高及控制復方靈芝顆粒的質量，本文對五味子中的五味子甲素進行含量測定，建立質量標準。本方法簡便，準確，重現(xiàn)性好。
1 儀器和試藥
日本島津LC-10AT HPLC儀; N2000色譜工作站。甲醇(色譜純，Merck公司出品);雙蒸餾水(自制)，其他試劑為分析純。五味子甲素標準對照品購于中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用，批號為110764-200107)，復方靈芝顆粒(自制，批號：20050201、20050202、20050203、20050204)。
2 方法與結果
2.1 色譜條件的選擇
色譜柱:Inertsil (C18,5 μm,250 mm×4.6 mm);檢測波長：254 nm;流動相：甲醇-水(75∶25),流速：1 mL・min-1;進樣量10 μL;柱溫：30 ℃。取一定濃度樣品進行測定，此條件下所測五味子甲素與樣品中其他組分色譜峰完全分離，色譜峰形對稱而尖銳(拖尾因子T=1.00)，按五味子甲素峰計算，理論板數(shù)不小于2000。
2.2 陰性對照試驗
取處方量以相同工藝制備的陰性對照(缺五味子)，按上述方法測定，結果為：陰性對照色譜圖中在與五味子甲素對照品色譜圖相對應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，結果表明陰性對照(含靈芝、柴胡和郁金三味藥材)用相同制備方法下提取的成分在測定波長處無吸收，故其他成分其他對五味子甲素測定無干擾，見圖1。
2.3 樣品溶液制備
2.3.1 對照品溶液的制備
取五味子甲素對照品1005 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解后稀釋至刻度,搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液(40.2 μg・mL-1)。
2.3.2 供試品溶液的制備
取本品約4 g，研細，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，加氯仿約40 mL，超聲處理30 min，濾過，殘渣加氯仿30 mL，超聲處理30 min，濾過，合并兩次濾液，將容器和濾紙多次洗滌液并入濾液中，揮干,殘渣加甲醇溶解并轉移置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.4 線性關系考察
精密吸取五味子甲素對照品貯備液 (0.402 mg・mL-1) 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，置5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別取上述對照品溶液各10 μL進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積(A)為縱坐標，進樣量(m)為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程A=1 194 733m+59 047，r=0.999 6。其線性范圍為0.402～6.432 μg，結果表明在此范圍內呈良好的線性關系。
2.5 精密度試驗
取上述對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測定，其RSD=0.75%(n=6)。
2.6 穩(wěn)定性試驗
取上述對照品溶液10 μL，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣測定，其RSD=0.98%(n=6),表明樣品在12 h以內是穩(wěn)定的。
2.7 重復性試驗
取供試品(批號：20050201)6份，每份約4 g，按“23”項下方法制備并測定，測出五味子甲素平均含量為15.3 mg・g-1，RSD=1.21%(n=6)。
2.8 加樣回收試驗
取已知含量供試品(批號：20050201，含量15.3mg・g-1)，加入定量的五味子甲素對照品溶液，依樣品測定項下的方法測定，計算其回收率=99.27%，RSD=1.02%(n=6)，結果見表1。表1 回收率測定結果(略)
2.9 樣品測定
分別吸取對照品和供試品溶液各10 μL，按上述方法測定供試品中五味子甲素含量，其結果(n=3)為：批號20050201為15.3 mg・g-1、批號20050202為14.2 mg・g-1、批號20050203為16.5 mg・g-1和批號20050204為13.7 mg・g-1。
3 討 論
3.1 本品由靈芝、五味子等4味藥材組成，曾經對靈芝所含腺苷等成分進行測定[1]，但其含量較低(低于0.01%)，干擾嚴重，不宜作為指標成分;結果選用五味子中的五味子甲素作為定量指標，用HPLC法測定其含量，結果陰性無干擾，且方法穩(wěn)定可靠，專屬性強，重復性好。
3.2 測定時應注意掌握好樣品前處理，曾經采用索氏提取[2]，加熱回流，超聲提取對樣品進行處理，結果以超聲提取兩次較為完全，操作簡單快捷。
3.3 經過比較不同比例的甲醇水(65∶35)、(75∶25)、(85∶15)，乙腈-水-冰醋酸(70:30:0.1)[3]等流動相系統(tǒng)對本品中五味子甲素與雜質的分離度與保留時間，發(fā)現(xiàn)流動相甲醇水(75∶25)能保證所測本品與雜峰完全分離(分離度R≥1.5)，色譜峰形對稱而尖銳(拖尾因子T=1.00)。
參考文獻:
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[2]劉霞，楊遠明，蔡敏芝，等. HPLC測定肝平膠囊中五味子甲素含量中成藥[J].中成藥，2004，26(7)，601.
[3]杜英峰,袁志芳，王春英，等. 高效液相色譜法同時測定護肝片中五味子甲素和五味子乙素的含量[J]. 藥物分析雜志，2004，24(4)：397.
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