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脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)探討
干細(xì)胞是具有自我增殖及更新能力的細(xì)胞，依據(jù)不同分化階段可分為成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞兩類，以下是小編搜集整理的一篇探究脂肪干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì)的論文范文，歡迎閱讀查看。
【摘要】目的探討脂肪干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì)。方法健康志愿者6例，志愿者均與抽脂要求相符，作為研究組;將同期另選6例健康志愿者作為對(duì)照組。分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25g，給予培養(yǎng)，并觀察目標(biāo)細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn)，同時(shí)對(duì)異體脂肪干細(xì)胞及淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)的增殖情況進(jìn)行觀察。結(jié)果脂肪干細(xì)胞沒有造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問(wèn)題，且對(duì)照組與研究組每毫升細(xì)胞液細(xì)胞數(shù)(CPM)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論脂肪干細(xì)胞有較小排斥反應(yīng)，臨床應(yīng)引起重視，加強(qiáng)培養(yǎng)及分離技術(shù)研究。
【關(guān)鍵詞】脂肪干細(xì)胞;免疫學(xué)性質(zhì)
干細(xì)胞是具有自我增殖及更新能力的細(xì)胞，依據(jù)不同分化階段可分為成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞兩類。與間質(zhì)干細(xì)胞相對(duì)比，脂肪干細(xì)胞(ADSCs)在體外更易擴(kuò)增，獲得容易，且免疫原性低，是臨床醫(yī)學(xué)及組織工程發(fā)展的重要突破。本探究分析脂肪干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì)，現(xiàn)報(bào)告如下。
1資料與方法
1.1一般資料
搜集本院2014年3月～2015年3月健康志愿者6例，志愿者均與抽脂要求相符，作為研究組;另選同期6例健康志愿者作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：均對(duì)本研究知情;均身體健康。研究組女3例，年齡21～37歲，平均年齡(28.46±3.36)歲;男3例，年齡20～38歲，平均年齡(29.65±3.34)歲。對(duì)照組女3例，年齡22～38歲，平均年齡(28.51±3.29)歲;男3例，年齡21～38歲，平均年齡(29.70±3.42)歲。兩組健康志愿者性別、年齡一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。
1.2方法
分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25g，將其放在離心管中，后轉(zhuǎn)為培養(yǎng)皿中，準(zhǔn)備處理，離心管與培養(yǎng)皿均為無(wú)菌;剔除組織中筋膜及血管，使用無(wú)菌溶液反復(fù)進(jìn)行沖洗;處理后，用眼科剪對(duì)其進(jìn)行分割，大小約為1.5mm3，直至分割成糊狀，在37℃環(huán)境下，選擇Ⅰ型膠原酶(0.1%)予以震蕩進(jìn)行消化處理，速度為120r/min;采用LG-DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清(10%)終止消化，并離心10min，后獲得高濃度的間質(zhì)組織細(xì)胞團(tuán)，對(duì)其進(jìn)行處理，選擇紅細(xì)胞裂解液，并去除紅細(xì)胞，采用篩網(wǎng)(100μm)進(jìn)行過(guò)濾;將過(guò)濾液取出，使用鏈霉素100g/L、青霉素100U/ml、LG-DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清進(jìn)行重懸處理;處理后，將其置于培養(yǎng)皿中，直徑為100mm，接種，設(shè)定濃度4×104/cm2;接種后，在體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，溫度設(shè)定為37℃，且每隔2d更換一次培養(yǎng)液;待細(xì)胞生長(zhǎng)檢測(cè)80%～90%時(shí)，按照比例1∶2進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
觀察目標(biāo)細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn)，方法選擇流式細(xì)胞術(shù)。首先使用BSA-PBS溶液(0.5%)對(duì)脂肪干細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行洗滌，離心10min，1000r/min，獲取單細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)變細(xì)胞濃度1×109/L;其次對(duì)組織相容性抗原Ⅰ(MHCⅠ)、MHCⅡ、CD44、CD29、CD90、CD31、CD45、CD34進(jìn)行熒光標(biāo)記，將標(biāo)記后物質(zhì)加入懸液，將其和熒光標(biāo)記的非特異性IgG同型進(jìn)行對(duì)比分析，在37℃環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，30min后，反復(fù)使用PBS進(jìn)行處理，使用多聚甲醛予以固定，用量30g/L，最后實(shí)施檢測(cè)，儀器選擇流式細(xì)胞儀。
1.3觀察指標(biāo)
觀察細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn)，同時(shí)對(duì)異體脂肪干細(xì)胞及淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)的增殖情況進(jìn)行觀察。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1脂肪干細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn)
采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脂肪干細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn)，陰性表達(dá)抗原：CD31(2.81±1.04)%，CD34(17.12±0.54)%，CD45(1.39±0.27)%。陽(yáng)性表達(dá)抗原：CD29(91.22±1.03)%，CD44(90.83±2.37)%，CD90(94.02±0.69)%。由此得知，脂肪干細(xì)胞無(wú)造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問(wèn)題。
2.2淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)情況
對(duì)照組與研究組CPM比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表示脂肪干細(xì)胞對(duì)異體移植的排斥作用較小。見表2。
3討論
脂肪的組織基質(zhì)內(nèi)存在大量ADSCs，作為成體干細(xì)胞，具有多向分化潛質(zhì)，在誘導(dǎo)條件適宜的情況下可分化成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等，且增殖能力較強(qiáng)。研究顯示，ADSCs不僅具有細(xì)胞多分化功能，如軟骨、肌肉、成骨、神經(jīng)、脂肪等，而且其表面標(biāo)志表達(dá)同BMSs(骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)一致，包括CD166、CD106、CD105、CD29等[1]。B7-1、HLA類抗原、B7-2、CD40L和CD40在BMSc不表達(dá)，體外BMSc能對(duì)淋巴細(xì)胞的反應(yīng)進(jìn)行抑制，而體內(nèi)應(yīng)用BMSc可使異體移植皮片成活時(shí)間延長(zhǎng)，故同種異體BMSc是目前組織工程主要細(xì)胞來(lái)源[2]。
體外培養(yǎng)時(shí)ADSCs對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制及刺激能力為ADSCs體外的免疫學(xué)性質(zhì)，試驗(yàn)包括單向淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、雙向淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，前者主要用以檢測(cè)刺激細(xì)胞ADSCs所致淋巴細(xì)胞的增殖程度，數(shù)值用增殖后的數(shù)量表達(dá)，且數(shù)值和ADSCs免疫原性之間呈正相關(guān);后者主要用來(lái)檢測(cè)雙方抑制淋巴細(xì)胞增殖的作用，不對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)行滅活，互相作為反應(yīng)細(xì)胞及刺激細(xì)胞，數(shù)值用增殖后兩種細(xì)胞的總數(shù)量表達(dá)。ADSCs體外試驗(yàn)與多種可控因素相關(guān)，在體內(nèi)試驗(yàn)中，ADSCs免疫學(xué)性質(zhì)為復(fù)雜性免疫反應(yīng)綜合作用的結(jié)果，異基因抗原免疫反應(yīng)與細(xì)胞因子、補(bǔ)體系統(tǒng)等密切相關(guān)。脂肪干細(xì)胞沒有造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問(wèn)題，對(duì)異體移植的排斥作用較小，臨床應(yīng)加強(qiáng)對(duì)細(xì)胞分離及培養(yǎng)的深入研究。
參考文獻(xiàn)
[1]韓長(zhǎng)杰，楊向群，張傳森.脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì).中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14(27)：5095-5098.
[2]孔志華，袁玉林，熊志，等.脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)分析.現(xiàn)代診斷與治療，2014，25(22)：5080-5082.
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