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綠色熒光蛋白標(biāo)記的人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165基因重組腺病毒載體的
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 田衛(wèi)東 白曉峰 |
| 第1作者單位： | 4川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院口腔頜面外科 |
| 論文摘要： | 目的 構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白的高效重組腺病毒載體AdGFP/hVEGF165。方法 應(yīng)用重組腺病毒構(gòu)建系統(tǒng)，以細(xì)菌內(nèi)質(zhì)粒間同源重組法構(gòu)建復(fù)制缺陷型重組腺病毒載體。首先將VEGF165cDNA亞克隆到穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV上，重組穿梭質(zhì)粒經(jīng)PmeⅠ酶切線性化后，轉(zhuǎn)入已含有腺病毒骨架載體的BJ5183中。同源重組后，重組的病毒質(zhì)粒pAdGFP/ hVEGF165經(jīng)卡那霉素平板篩選獲得。經(jīng)酶切分析鑒定后，重組病毒質(zhì)粒用PacⅠ酶切線性化，通過(guò)脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染人胚腎293細(xì)胞。經(jīng)過(guò)包裝、擴(kuò)增和純化后，測(cè)定病毒滴度。結(jié)果 重組腺病毒質(zhì)粒經(jīng)PacⅠ酶切鑒定，在凝膠電泳中獲得診斷性片段，轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞病變效應(yīng)。PCR鑒定括增出測(cè)定相應(yīng)的片段。重組腺病毒的滴度為：6×109pfu/m。結(jié)論 應(yīng)用重組腺病毒構(gòu)建系統(tǒng)，以細(xì)菌內(nèi)質(zhì)粒間同源重組法可成功地獲得重組腺病毒載體AdGFP/hVEGF165，重組腺病毒載體中含有GFP的標(biāo)記基因可直觀檢測(cè)靶細(xì)胞轉(zhuǎn)染和外源基因的表達(dá)情況，為今后深入研究VEGF基因治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 |
| 關(guān)鍵詞： | 腺病毒載體，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，同源重組 遠(yuǎn)程下載 論文(免費(fèi)PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2005年06月13日 |
| 同行評(píng)議： | （暫時(shí)沒(méi)有） |
| 綜合評(píng)價(jià)： | （暫時(shí)沒(méi)有） |
| 修改稿： |
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