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研究婦潔顆粒的體外、體內(nèi)抗菌活性
摘要：目的研究觀察婦潔顆粒的體外、體內(nèi)抗菌活性。方法采用平皿二倍稀釋法測(cè)定了婦潔顆粒對(duì)臨床分離的64株臨床常見的革蘭氏陽性及革蘭氏陰性菌的體外抗菌作用。選擇了金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌及乙型溶血性鏈球菌進(jìn)行了小鼠體內(nèi)細(xì)菌感染的保護(hù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果該藥體外對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大腸桿菌的作用為最強(qiáng)，MIC50分別為0.25，2和1 g·L-1；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也顯示對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及變形桿菌造成的體內(nèi)感染動(dòng)物有較好的保護(hù)作用。結(jié)論對(duì)臨床常見的革蘭氏陽性及革蘭氏陰性菌均具有較強(qiáng)的殺滅或抑制作用。關(guān)鍵詞： 婦潔顆粒； 抑菌； 大腸桿菌； 金黃色葡萄球菌
陰道炎、宮頸炎是婦科多發(fā)病、常見病，大多數(shù)是由細(xì)菌等病原微生物引起，長(zhǎng)期炎癥，可發(fā)展為宮頸糜爛。婦潔顆粒為治療陰道炎、宮頸炎的中成藥，具有清熱解毒、活血消炎的功效。為了解抗菌譜及藥效，我們對(duì)婦潔顆粒進(jìn)行了抗菌實(shí)驗(yàn)研究。
1 材料
1.1 受試物 婦潔顆粒，深棕色膏劑，每克膏相當(dāng)于生藥3.029 g，由本所提供，批號(hào)020820；陽性對(duì)照藥：婦樂沖劑：規(guī)格6 g/袋，山東泰安紅旗制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)020309。
1.2 菌種、動(dòng)物與試劑 實(shí)驗(yàn)菌株，本實(shí)驗(yàn)共選用7種細(xì)菌。包括金黃色葡萄球菌12株、表皮葡萄球菌10株、大腸桿菌14株、腸球菌10株、普通變形桿菌12株、乙型溶血性鏈球菌6株，共計(jì)64株。以上菌株均為山東大學(xué)齊魯醫(yī)院收集的臨床分離菌株。全部菌種均進(jìn)行常規(guī)方法鑒定；金黃色葡萄球菌ATCC25922、大腸埃希氏菌ATCC25923，均來源于中國(guó)藥品生物制品檢定所。以上述菌株作為試驗(yàn)中的質(zhì)控菌株，各菌分別稀釋至終濃度為105 cfu/ml備用。健康昆明種小鼠，體重18～22 g，由山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)提供，合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)字D20020921。營(yíng)養(yǎng)肉湯，衛(wèi)生部上海生物制品研究所生產(chǎn)，批號(hào)000101；MH瓊脂，上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)990601。
1.3 供試品的配制采用二倍稀釋法將婦潔顆粒及婦樂沖劑分別稀釋配制成終濃度分別為128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25 g/L的含藥瓊脂平皿培養(yǎng)基，乙型溶血性鏈球菌用含有10%脫纖維的兔血含藥血液瓊脂平皿培養(yǎng)基，冷藏備用。以上操作均在無菌條件下進(jìn)行。
2 方法
2.1 實(shí)驗(yàn)菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株的最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定［1］ 將稀釋好的菌液用多點(diǎn)接種儀分別接種到上述各含不同濃度藥物的瓊脂平皿培養(yǎng)基的表面上，37℃培養(yǎng)18 h，無細(xì)菌生長(zhǎng)的平皿中所含藥物的最低濃度即為該藥物的最小抑菌濃度(MIC)。
2.2 對(duì)感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)［2］ 實(shí)驗(yàn)菌液的制備：將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、乙型鏈球菌分別定量接種于適宜的MH肉湯或含10%羊血的MH肉湯中，放孵箱37℃增菌6 h，取此菌液0.1 ml轉(zhuǎn)種于10 ml MH肉湯或含10%羊血MH肉湯中，放孵箱37℃孵育18 h，該菌為原菌液，適當(dāng)稀釋后，用5%滅菌胃膜素配制成感染動(dòng)物所需濃度菌液，供實(shí)驗(yàn)用。
最小致死量（MLD）實(shí)驗(yàn)：將原菌液用5%胃膜素進(jìn)行遞次稀釋。選健康小鼠若干，雌雄各半，分別腹腔注射不同濃度的各菌液，進(jìn)行各菌株的最小致100%動(dòng)物死亡（MLD）測(cè)試，測(cè)得金黃色葡萄球菌MLD為5×108 cfu/ml，大腸桿菌MLD為5×109 cfu/ml，變形桿菌MLD為5×108 cfu/ml，乙型鏈球菌MLD為1×106 cfu/ml。
對(duì)感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)：選健康昆明種小鼠18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，同時(shí)設(shè)MLD和1/10 MLD各1組，分別給每只小鼠腹腔注射菌液0.5 ml MLD菌量，于感染后即刻，6，12，24，48，72 h給各組小鼠不同濃度的藥物，觀察并記錄感染后小鼠死亡數(shù)，連續(xù)觀察14 d，根據(jù)小鼠死亡數(shù)，按Bliss法計(jì)算半數(shù)有效劑量ED50值及95%的可信限。
3 結(jié)果
3.1 婦潔顆粒對(duì)64株細(xì)菌的MIC測(cè)定 婦潔顆粒對(duì)大多數(shù)試驗(yàn)菌種的MIC范圍均在0.25～32 g/L之間，MIC50多為0.25～8 g/L，對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大腸桿菌的作用為最強(qiáng)，MIC50分別為0.25，2和1 g/L，對(duì)變形桿菌和腸球菌作用次之，MIC50均為4g/L，對(duì)乙型溶血性鏈球菌的作用較弱，MIC50為32 g/L。同時(shí)，婦潔顆粒對(duì)2株標(biāo)準(zhǔn)菌株也有較好的抑制作用，對(duì)ATCC25922，ATCC2592的MIC分別為2，1 g/L。綜合上述結(jié)果，婦潔顆粒對(duì)試驗(yàn)中大部分革蘭氏陽性及革蘭氏陰性菌均具有較強(qiáng)的殺滅或抑制作用，抗菌譜較為廣泛。結(jié)果見表1。表1 婦潔顆粒對(duì)64株細(xì)菌的MIC測(cè)定
3.2 婦潔顆粒對(duì)感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn) 各組動(dòng)物感染上述4種細(xì)菌后30 min出現(xiàn)怠動(dòng)，繼而出現(xiàn)臥位，精神萎靡、呼吸急促，死亡多發(fā)生在48 h之內(nèi)。陽性對(duì)照藥婦樂沖劑組動(dòng)物感染后也出現(xiàn)上述癥狀。隨著用藥劑量的增加，死亡時(shí)間延遲。婦潔顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及變形桿菌造成的體內(nèi)感染有較好的保護(hù)作用，見表2。由于受藥物濃度的限制，乙型鏈球菌造成的小鼠體內(nèi)感染未做出存活率為100%的保護(hù)劑量。結(jié)果見表2。
4 討論
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：婦潔顆粒對(duì)臨床常見大部分革蘭氏陽性及革蘭氏陰性菌均具有較強(qiáng)的殺滅或抑制作用，抗菌譜較為廣泛。體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)表明，婦潔顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及變形桿菌有較好的體內(nèi)保護(hù)作用。表2 婦潔顆粒對(duì)感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)
臨床上引起陰道炎和宮頸炎的常見病原菌有金葡菌、大腸桿菌、變形桿菌等,婦潔顆粒在臨床上對(duì)陰道炎和宮頸炎有較好的治療作用,是與該藥對(duì)常見致病菌有較強(qiáng)的抑制作用和較廣泛的抗菌譜分不開的。
【參考文獻(xiàn)】
［1］ 李影林.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)全書［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：1054.
［2］ 張均田.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法［M］.北京：北京醫(yī)科
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