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慢性阻塞性肺疾病患者誘導(dǎo)痰IL8、TNFα水平和炎癥細胞的分布
【摘要】 目的 比較穩(wěn)定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)老年患者、老年健康吸煙者和老年健康非吸煙者痰液中IL8、TNFα水平和炎癥細胞組成的差異，進而探討IL8、TNFα、中性粒細胞與吸煙的相關(guān)性以及COPD氣道炎癥的性質(zhì)。 方法 98例老年研究對象分為3組：COPD組38例、健康吸煙組（HS）30例、健康不吸煙組（HNS）30例，誘導(dǎo)痰方法收集痰液，細胞分類及計數(shù)，并用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定痰上清液中IL8、TNFα濃度。結(jié)果 COPD組痰液中IL8,、TNFα、中性粒細胞百分比明顯高于健康吸煙組及健康不吸煙組；COPD組痰液中IL8、TNFα水平與中性粒細胞百分比呈顯著正相關(guān)性（r=0761,r=0495）；健康吸煙組痰中IL?8水平與中性粒細胞百分比亦呈顯著正相關(guān)性（r=0544）。結(jié)論 IL8和TNFα和中性粒細胞共同參與了吸煙者COPD氣道炎癥反應(yīng)。【關(guān)鍵詞】 慢性阻塞性肺疾病；氣道炎癥；IL?8；TNF?α；中性粒細胞
約80%～90%的慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者是吸煙者，但是僅有20%的吸煙者發(fā)展為COPD〔1〕，提示對COPD易感性不同的人群，其氣道對同樣的香煙刺激的反應(yīng)性不同。目前認為，吸煙引起的氣道和肺組織異常的炎癥反應(yīng)是COPD發(fā)病學(xué)的中心環(huán)節(jié)，多種炎癥細胞、炎癥介質(zhì)和細胞因子參與COPD復(fù)雜的炎癥網(wǎng)絡(luò)。以往的研究認為在COPD急性加重期氣道中性粒細胞明顯增加〔2〕，而在穩(wěn)定期COPD患者和吸煙肺功能正常者之間氣道中性粒細胞是否存在差異爭議頗大〔3～5〕。IL?8和TNF?α有較強的中性粒細胞趨化作用，本文比較了穩(wěn)定期COPD老年患者、老年健康吸煙者和老年健康非吸煙者痰液中IL?8、TNF?α水平炎癥細胞的差異，進而探討COPD氣道炎癥的性質(zhì)。
1 材料與方法
1?1 研究對象
本研究對象均為男性，來自2004～2005年門診病例及健康查體人員，經(jīng)詢問病史、體檢、X線檢查、肺通氣功能檢查，分為以下3組：
1?1?1 COPD組
符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會COPD診斷標準〔6〕并處于穩(wěn)定期的患者38例，年齡60～78歲，平均（63?6±6?2）歲，均有吸煙史，其中戒煙者4例，戒煙年限15～23年，吸煙年限18～46年，根據(jù)肺功能測定結(jié)果，對COPD的嚴重程度進行分級〔6〕。本組病人支氣管舒張試驗均為陰性，排除呼吸道變態(tài)反應(yīng)病史及肺癌、心功能不全等疾患。
1?1?2 健康吸煙組（HS）
30例，年齡61～73歲，平均（64?1±5?9）歲。肺功能檢測FEV1?0占預(yù)計值(pred)百分比均＞80% ，F(xiàn)EV1?0/FVC均＞70%，支氣管舒張試驗均為陰性。排除呼吸道變態(tài)反應(yīng)病史及肺癌、心功能不全等疾患。
1?1?3 健康不吸煙組(HNS)：30例，年齡60～74歲，平均（63?5±7?1）歲。肺功能檢測FEV1?0占預(yù)計值百分比均＞85%，F(xiàn)EV1?0/FVC均＞70%。
1?2 實驗步驟及方法
1?2?1 肺功能檢查
所有研究對象在入選前進行肺功能測定，記錄用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼氣量(FEV1)、第1秒用力呼氣量占預(yù)計值百分比(FEV1/pred%)、第一秒用力呼氣量占用力肺活量的百分比(FEV1/FVC%)。
1?2?2 痰標本的收集及處理
參照文獻〔7，8〕報道的方法，首先吸入喘康速200 μg，超聲霧化吸入3%高滲鹽水（霧化量為0?4 ml/min），霧化時間為5～10 min。將病人咳出的痰收集于無菌干燥的培養(yǎng)皿中，挑選出黏液部分放入無菌干燥試管中稱重，加入4倍量0?1%DTT（二硫蘇糖醇），37℃水浴15 min，以有效溶解痰液，再加入4倍量磷酸鹽緩沖液（0?01 mol/L pH7?4 PBS）充分洗滌細胞5 min，2 000 r/min離心10 min。離心后的上清液-70℃保存待測，沉淀留作痰細胞學(xué)檢查。
1?2?3 痰液細胞計數(shù)及分類
制備痰細胞學(xué)涂片2～3張，室溫下自然風(fēng)干，做HE染色。光學(xué)顯微鏡下進行細胞計數(shù)及分類，至少計數(shù)300個細胞，分類計數(shù)中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞及嗜酸性粒細胞，檢查兩張涂片，取其平均數(shù)，得出各種細胞所占百分率。
1?2?4 痰上清液IL?8、TNF?α濃度的檢測
IL?8、TNF?α采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。操作步驟按試劑盒(美國GeneMay公司)說明書進行，敏感度為16 pg/ml。
1?3 統(tǒng)計學(xué)分析
數(shù)據(jù)均以x±s表示，組間比較分析用t檢驗或t′檢驗、χ2檢驗。數(shù)值變量之間的依存關(guān)系用相關(guān)系數(shù)r表示，并應(yīng)用t檢驗，使用統(tǒng)計學(xué)處理軟件醫(yī)用CS10?3、Microsoft excell處理原始數(shù)據(jù)，并圖示其相關(guān)性。
2 結(jié) 果
2?1 COPD組與HS組病例資料比較
見表1。表1 COPD組與HS組病人資料比較(略)
2?2 炎癥細胞計數(shù)與分類
痰液中的細胞主要是中性粒細胞和巨噬細胞，嗜酸性粒細胞、淋巴細胞。COPD組誘導(dǎo)痰中性粒細胞百分比明顯高于HS組（t=8?34）及HNS組（t=11?15 ），差異有顯著性（P＜0?01）。HS組與HNS組痰中性粒細胞的百分比相比較，差異有顯著性(t=3?48,P＜0?01)。各組間嗜酸性粒細胞和淋巴細胞分類差異無顯著性（見表2）。表2 各組痰液細胞分類的比較(略
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