藤黃酸HP-β-CD包合物凍干粉針的質量標準初步研究

藤黃酸HP-β-CD包合物凍干粉針的質量標準初步研究

【摘要】  目的  制備藤黃酸的HP-β-CD包合物凍干粉針,并初步考察藤黃酸包和物凍干粉針的質量標準。方法 采用冷凍干燥法制備包和物，HPLC分析藤黃酸的體外釋放規律，并測定包合物凍干粉中藤黃酸的含量。結果 優化的包合工藝制備的凍干粉針外觀形態，溶解性好, 用生理鹽水稀釋200毫升后在一個半小時內釋放不超過20%,建立的含量測定方法重現性好、準確簡便。結論 含量測定方法可行，包合及凍干工藝優化合理。
【關鍵詞】  藤黃酸  包合物  質量標準
        1  藤黃酸的提取分離純化工藝
        1.1.1藤黃酸的提取
        稱取藤黃原料200g，加丙酮800ml，溫度控制在60℃左右，回流提取2 h，倒出上清液后繼續加600ml，400ml的丙酮，依次反應2h，1h 回收多余溶劑，旋蒸提取物，再放置恒溫水浴鍋中蒸發至溶劑很少再置于真空干燥儀中得藤黃酸粗提物的干燥品132g。
        1.1.2藤黃酸吡啶鹽的制備
        稱取藤黃酸粗提物50g，加入吡啶85ml，于70℃水浴上加熱溶解，趁熱抽濾，濾瓶等容器用少量吡啶洗滌，合并洗液，濾液，量筒量取共計140ml。按以前探索的條件：100/13=140/X，X=18ml，加入溫熱蒸餾水18ml，攪拌，放置冰箱中過夜，析出沉淀，抽濾得到橙紅色沉淀，70%吡啶洗3次共100ml，水洗3次，于60℃烘箱中烘干，得藤黃酸吡啶鹽40g。
        1.1.3藤黃酸的純化
        稱取藤黃酸吡啶鹽粗品40g，加入甲醇:乙酸乙酯=16：1的混合液85ml，80℃回流至完全溶解后，趁熱抽濾，濾液置冰箱中冷藏過夜，析出大量橘紅色沉淀，抽濾，濾餅烘干，得藤黃酸吡啶鹽精品21.5g。將重結晶得到的藤黃酸吡啶鹽用CH2Cl２溶解，依次由1N鹽酸,水洗至中性，合并有機層，無水Na2SO4,干燥，過濾，濾液于56℃旋蒸濃縮至少量，轉移到蒸發皿中，于60℃真空干燥，得藤黃酸5.91 g。
        1.1.4自制藤黃酸的驗證
        用熔點儀對制備的藤黃酸連續進行三次熔點測定分別為： 82.4~83.1℃，82.6~83.0℃，82.1~83.7℃.與文獻值:80~83℃相符。
        2  不同濃度的HP－β－CD對藤黃酸的增溶作用
        依次配成濃度為4％、8％、12％、16％、20％、24％、28％、32％、36％、40％、44％、48％的HP-β-CD2ml的水溶液，另取1.2g藤黃酸溶于16mlC2H5OH。溫度控制在30℃-40℃，向上述不同濃度的HP-β-CD的溶液中逐漸滴加0.8ml藤黃酸的C2H5OH溶液，即每毫升溶液里面滴加30mg的藤黃酸，反應24小時。溫度分別為室溫、40℃-50℃、50℃-60℃，其它條件不變進行同樣的反應，經高效后觀察50℃~60℃的條件下增溶效果最好。50℃-60℃經HPLC后結果。48％ 637563
        增溶試驗結果表明HP-β-D對藤黃酸有增溶作用,相溶解度圖顯示出典型的AN型特征。一般AN型特征的藥物包合物的表觀穩定常數不能計算或計算沒有意義。盡管包合機理復雜,包合物主客分子比較難以計算,但是可以肯定的是HP-β-CD可以與藤黃酸在溶液中形成包合物，屬于不穩定包合，需要考慮稀釋穩定性，所以加入L－精氨酸助溶[1]。
        2.2藤黃酸的包合
        依次配制濃度為10%、20%、30%、40%、50%、60%的2mlHP－β－CD水溶液。另取藤黃酸0.3g，用8ml無水乙醇溶解，溫度控制在50℃～60℃，分別向上述不同濃度的HP－β－CD溶液滴加0.8ml藤黃酸乙醇溶液，即每份溶液中加了30mg的藤黃酸，攪拌反應24小時。反應結束后將反應液倒入小安瓿瓶中，再用少量蒸餾水洗圓底燒瓶，一并倒入小安瓿瓶中，置冰箱中冷凍結冰
        2.3藤黃酸成鹽后的包合
        稱取L-精氨酸0.6g于小錐形瓶中，加入4 ml蒸餾水，攪拌溶解后，再分批加入藤黃酸0.12g，使之完全溶解。另取HP－β－CD0.9g、0.6g、0.3g于25 ml圓底燒瓶中，加入2ml蒸餾水使溶解，緩緩滴加上述L－精氨酸的藤黃酸溶液1ml，即HP－β－CD的濃度為30%、20%、10%的溶液，于50℃～60℃水浴中反應8～9小時，反應結束后將反應液轉移至小安瓿瓶中，置冰箱中冷凍結冰[2]。
        2.4凍干粉中藤黃酸含量測定的研究
        2.4.1藤黃酸成鹽后最大吸收波長的確定
        取藤黃酸鹽溶液適量,加甲醇溶解并稀釋制成濃度約為10ug/ml，按分光光度法,在200～400 nm波長范圍內進行掃描,測定其最大吸收波長為365nm。
        2.4．2條件與系統適用性試驗   
        色譜柱：HypersilODSC18色譜柱（4.6mm×250mm，25 μm)；
        流動相：甲醇-0.1%H3PO4(9∶1)；檢測波長365 nm；流速1.0 mL·min-1；進樣        體積20 μL；柱溫為室溫。甘露糖衍生物峰理論塔板數計算不低于50000。 
        2.4.3藤黃酸成鹽的標準曲線
        配制2ml10％、20％、30％的HP－β－CD溶液，再配制15％的L－精氨酸溶液，使每毫升中含有30mg的藤黃酸，配制成鹽。在50～60℃條件下反應8小時[3]，在反應過程中緩緩加入上述鹽溶液1ml，反應結束將反應液稀釋100倍。

     2.4.2.4.4黃酸的含量測定
分別取3批號的凍干粉各五份，再用甲醇溶解并稀釋成合適的濃度超聲3次，每次20分鐘[4]，進樣分析。
        2.4.5精密度試驗  取一批片劑樣品用甲醇稀釋并超聲后連續進樣6次，結果RSD=0.65%。
        2.4.6 重現性試驗  對同一批片劑樣品按2.4.4中的方法重復平行測定5次，RSD=0.91%。
        2.4.7 回收率  取樣品兩份，一份用甲醇稀釋并超聲3次后定量加入藤黃酸對照品后測定含量，另一份不加對照品測定含量，計算回收率。結果回收率分別為100.67%和98.34%，RSD分別為2.74%和3.22%(n=5)。
        2.5凍干粉用生理鹽水稀釋后藤黃酸體外釋放的規律研究
        配置質量分數為10%、15%、20%、25%、30%的HP-β-CD的水溶液，分別滴加藤黃酸鹽溶液各1毫升（含藤黃酸30毫克），溫度控制在50℃～60℃下反應8小時,反應液用生理鹽水稀釋成200ml之后，在一個半小時內連續進樣7針，HPLC分析結果。
        第1針進樣基本反映出反應的包合率，當HP-β-CD的質量分數大于20%時，包合率達到90%以上，在一個半小時內從HP-β-CD中釋放出來的藤黃酸的量不超過25%,并且HP-β-CD的質量分數越大釋放得越少。以體外釋放情況作為對包合工藝的評價標準，最終確定了包合的優化工藝條件為：HP-β-CD的質量分數為30%，溫度50℃～60℃，反應時間8小時。
        3結果與討論
        HP－β－CD對藤黃酸有增溶作用，通過分析當HP－β－CD的濃度在0～16％時，藤黃酸溶解度與HP－β－CD的質量分數成正比，當HP－β－CD的濃度在大于16％時，對藤黃酸的增溶作用增加不明顯。
        優化的包合工藝的凍干粉在一個半小時內從HP-β-CD中釋放出來的藤黃酸的量不超過20%，基本達到試驗設計的目的。
        本實驗建立的含量測定方法精密度高、重現性好。
參 考 文 獻
[1] 于大海,高坤,孫英華,等.那格列奈-2-羥丙基-β-環糊精包合物的制備及其理化性質[J].沈陽藥科大學學報,2007,24(8):465-469.
[2] 殷殿書,蔣建蘭.紫杉醇透明質酸注射用凍干制劑的研究[J].中國藥學雜志,2004,39(11):839-841.
[3] 張慧穎,李學明,陳國廣,等.燈盞化素包和物凍干粉針劑的制備及安全性初步研究[J].中國藥學雜志,2007,42(6):457-460.
[4] 羅 蘭,孫殿甲,苗愛東.甲苯咪唑-β-環糊精包合物質量標準的研究[J].新疆醫科大學學報,2001,24(1) :66-67.

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