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形態(tài)檢查在臨床標(biāo)本細菌學(xué)檢驗中的作用論文
【摘要】 自動化和基因的檢測是臨床細菌學(xué)檢驗的發(fā)展趨勢，但形態(tài)學(xué)觀察在常規(guī)性工作仍是十分重要的。它可對自動化儀器檢測的結(jié)果進行復(fù)核和修正。把傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法與先進儀器檢測結(jié)合，將能為臨床提供更有效的信息。因此研究和發(fā)展病原生物學(xué)形態(tài)診斷技術(shù)對列舉醫(yī)學(xué)證據(jù)、完善醫(yī)學(xué)診斷具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】 臨床標(biāo)本,細菌學(xué)檢驗
自荷蘭人列文虎克（anton van leeuwenhoek 1632-1725）創(chuàng)制了第一臺可放大250倍的簡陋顯微鏡，發(fā)現(xiàn)許多肉眼不能發(fā)現(xiàn)的“活的小動物”以來，人類對微生物有了初步認識，特別近幾十年來，微生物學(xué)的研究迅速發(fā)展。涂片直接觀察是指將臨床送來作細菌學(xué)檢驗的各類標(biāo)本, 在進行革蘭染色之前, 將標(biāo)本涂成薄片在生物顯微鏡的高倍鏡下直接觀察, 評價涂片出現(xiàn)的各種病理情況及各種形態(tài)學(xué)特征, 可判斷病原微生物的感染情況,進而結(jié)合化學(xué)染色技術(shù)對感染的性質(zhì)作出快速的初步判斷。本文就各種臨床標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗中涂片鏡檢的作用展開討論。
1 尿液標(biāo)本檢驗
尿液標(biāo)本的濕片直接鏡檢結(jié)果往往可以作為進一步檢驗的依據(jù),根據(jù)涂片鏡檢結(jié)果進一步安排培養(yǎng)計數(shù)和細菌鑒定和藥敏試驗。Www.133229.cOm一般可將未離心的新鮮中段尿搖勻后滴片,用位相顯微鏡油鏡檢查。每份標(biāo)本檢查10個視野，每視野中有一個細菌,相當(dāng)于每毫升尿液中104～105個細菌［1］。每油鏡視野中發(fā)現(xiàn)10～1000個細菌,常可能有尿路感染,這時即可與臨床聯(lián)系進行初報［2］。衛(wèi)生部2001年新頒發(fā)《醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》中也提到“新鮮尿液經(jīng)離心,用相差顯微鏡檢查(400×),在30個視野中有半數(shù)視野見到細菌者可協(xié)助診斷尿路感染” 。如若每個油鏡視野均未見細菌,取10μl尿液接種在血平板上以防漏檢。若每油鏡視野中含菌0～9個,取10μl 尿液分別接種血液瓊脂平板和中國藍平板上培養(yǎng)后計數(shù)。若每油鏡視野含菌10個或以上,取尿液1μl涂平板計數(shù)，如尿液每油鏡視野中細菌達10個或以上,就可做直接藥敏試驗［3］。
2 痰液標(biāo)本檢驗
痰標(biāo)本中存在有大量固有菌群,檢驗中若不能將真正的致病菌檢出,必將對診斷和治療產(chǎn)生誤導(dǎo)。涂片鏡檢可先進行標(biāo)本合格性判定，一般每低倍視野扁平上皮細胞小于10個,白細胞大于25個,細菌較純,種數(shù)為1～2種即為合格標(biāo)本。若每視野中鱗狀上皮細胞≥10個,且發(fā)現(xiàn)種類繁多的各種細菌則為口腔唾液，可判斷為標(biāo)本不合格,若觀察到一些或很多不含鱗狀上皮細胞的視野,尤其是白細胞大量聚集的地方,換用油鏡檢查,注意細菌形態(tài)及染色性,為1～2種或優(yōu)勢菌很可能為病原菌。認請其細菌形態(tài)特點和染色性,在以后的培養(yǎng)物中要注意這類細菌菌落的出現(xiàn),這時就可做出初報(向臨床報告標(biāo)本的情況,有無炎癥,主要的細菌,革蘭染色性等),必要時與臨床醫(yī)師聯(lián)系了解病人情況。然后選用相應(yīng)培養(yǎng)基如血液瓊脂平板,巧克力色血平板,中國藍平板等,以四區(qū)劃線作半定量分析。另外痰培養(yǎng)的結(jié)果一定要和直接鏡檢的結(jié)果核對，培養(yǎng)出的優(yōu)勢菌和鏡檢優(yōu)勢菌應(yīng)相符，若二者不符,要首先考慮直接鏡檢所見［4］。
3 血培養(yǎng)標(biāo)本檢驗
臨床對血液標(biāo)本一般不做直接涂片，但對血培養(yǎng)瓶中可疑有菌生長者或自動分析儀血培養(yǎng)管中生長指數(shù)超標(biāo)者, 發(fā)現(xiàn)細菌生長信號,應(yīng)無菌抽取培養(yǎng)物涂片進行革蘭染色,查找細菌, 觀察細菌形態(tài)及染色性初報細菌的大致類別,同時用位相顯微鏡觀察有無細菌形態(tài) 、動力等特點，根據(jù)顯微鏡檢查的特征, 選擇合適的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種增菌。對革蘭染色未找到細菌的血培養(yǎng)瓶, 應(yīng)補充吖啶橙染色檢查,發(fā)現(xiàn)陽性者進行分離鑒定,未發(fā)現(xiàn)陽性則應(yīng)轉(zhuǎn)種厭氧和需氧血平板,然后繼續(xù)培養(yǎng)監(jiān)測至最終報告的時間。顯微鏡檢查如果發(fā)現(xiàn)形態(tài)很均一的細菌,可根據(jù)革蘭染色結(jié)果選擇抗菌藥物進行直接藥敏試驗,同時轉(zhuǎn)種培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)菌落,立即做細菌鑒定和標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗。一般在早晨發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)陽性以后,馬上做藥敏試驗,到下午4～5點時一般可出初步結(jié)果,向臨床初報,為臨床提供快速的信息，以后按常規(guī)的檢驗程序進行。
4 膿汁標(biāo)本檢驗
膿汁標(biāo)本的顯微鏡檢查必檢項目，每份膿汁標(biāo)本需進行革蘭染色和美蘭染色,以顯微鏡油鏡觀察細菌的種類、染色性和膿細胞形態(tài)。如果多形核白細胞占80～90%以上者可判定為急性炎癥,淋巴細胞較多者(>30%)為慢性炎癥。細菌的形態(tài)在原始標(biāo)本的涂片中常比在培養(yǎng)物中的更典型。在觀察細菌時要注意單一或混雜細菌,有無可疑厭氧菌等。如見著色淺而不均的革蘭陰性桿菌常為厭氧菌，提示需作厭氧菌培養(yǎng)。
5 腦脊液標(biāo)本檢驗
腦脊液涂片顯微鏡鏡檢是腦脊液檢驗的重要項目，對疾病臨床診斷及起始治療起重要作用。臨床微生物實驗室接到腦脊液標(biāo)本以后，應(yīng)該立即進行顯微鏡鏡檢,所見結(jié)果必須立即向醫(yī)師報告。假如腦脊液呈膿性混濁的,可以不經(jīng)過離心，如為漿液性，需要離心沉淀以后取沉渣作涂片顯微鏡鏡檢，樣材作三張涂片顯微鏡鏡檢。一作革蘭染色,觀察細菌形態(tài)和染色性,一作美蘭染色,觀察膿細胞種類也觀察細菌,一張備用作抗酸性染色檢查結(jié)核桿菌［5］。初步報告結(jié)果以后按常規(guī)的檢驗程序進行操作。
6 糞便涂片檢驗
糞便標(biāo)本一般不做直接涂片顯微鏡鏡檢, 但對懷疑有霍亂弧菌、葡萄球菌、彎曲菌、難辨芽胞梭菌和真菌感染者, 需進行直接涂片［1］。另外糞便推片革蘭染色檢查觀察正常菌群的種類、數(shù)量和比例等可輔助診斷腸道菌群失調(diào)癥。若涂片顯微鏡鏡檢觀察到大片葡萄球菌聚集,說明有葡萄球菌結(jié)腸炎,培養(yǎng)時應(yīng)增用血液瓊脂平板,看到大量產(chǎn)芽胞革蘭陽性大桿菌可能為難辨梭菌，結(jié)合臨床表現(xiàn)可以診斷抗生素相關(guān)性腹瀉和假膜性腸炎,分離時可增用ccfa選擇性培基作厭氧培養(yǎng)。腹瀉糞便中常見膿細胞，用位相顯微鏡直接檢查有時可見動力很強的彎曲菌［1］。
總之，現(xiàn)代臨床細菌學(xué)檢驗一方面要依靠高科技逐步建立檢驗自動化,另一方面要改進工作模式進行快速診斷,標(biāo)本直接涂片檢驗在細菌學(xué)鑒定中非常重要,其結(jié)果結(jié)合革蘭染色檢查, 可對標(biāo)本的性質(zhì)可以作出快速的初步判斷。如涂片直接觀察還可快速檢出真菌(包括念珠菌、隱球菌及其他酵母樣真菌),并增加真菌的培養(yǎng)檢查, 有意識將培養(yǎng)時間延長, 以避免漏檢。涂片鏡檢可明確革蘭染色性，是細菌鑒定的前提,若革蘭染色有誤，細菌的其他鑒定肯定也有誤,即使自動化儀器也是如此。同時涂片鏡檢的結(jié)果可修正儀器報告出現(xiàn)的錯誤,避免誤報。涂片鏡檢能將標(biāo)本中達到一定數(shù)量的死活菌均可檢出,對培養(yǎng)有重要的補充作用。另外涂片鏡檢有時還會獲得意外信息。如發(fā)現(xiàn)非白細胞有核細胞提示存在癌細胞的可能,可提示臨床做腫瘤細胞的檢查。直接涂片觀察還有利于發(fā)現(xiàn)活動的原蟲和其他寄生蟲等。所以實驗室工作人員應(yīng)應(yīng)主動加強涂片鏡檢工作,以提高檢驗質(zhì)量。
【參考文獻】
［1］過祥豹.原始標(biāo)本涂片檢查對微生物檢驗全過程的導(dǎo)航作用.臨床檢驗雜志,2002，20，25～28.
［2］張卓然, 倪語星.臨床微生物學(xué)和微生物檢驗學(xué)［m］. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2003, 7: 233.
［3］馬翔,孫麗君,等.傳統(tǒng)方法在臨床細菌學(xué)中的應(yīng)用［j］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2003 ,26 :453～454.
［4］林嘉,劉華.85份合格痰標(biāo)本涂片檢查與培養(yǎng)結(jié)果分析［j］.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志,1998,13，98～99.
［5］蔡文城.實用臨床微生物診斷學(xué)［m］.東南大學(xué)出版社,1998，11，71.
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